GENERACIÓN DE RAÍCES Y PLÁNTULAS TRANSGÉNICAS DE TORONJA Y LIMA DULCE MEDIANTE EL USO DE Agrobacterium rhizogenes

Resumen

La transformación genética es una técnica atractiva para el mejoramiento de los cítricos ya que evita los largos periodos juveniles y permite introducir nuevas características a un cultivar sin alterar los rasgos existentes. Un paso indispensable para aplicar esta tecnología de mejoramiento de los cítricos, es el desarrollo de sistemas eficientes de transformación genética que confieran ventajas agronómicas. En este reporte se presenta el desarrollo de sistemas de transformación genética basados en Agrobacterium rhizogenes para la toronja (Citrus paradisi cvs. Duncan y Rio Red) y la lima dulce (Citrus limmettioides). Primero se generaron raíces transformadas por medio del cocultivo de segmentos de tallo obtenidos de plántulas germinadas in vitro con A. rhizogenes cepa A4, que contenía el plásmido tipo silvestre pRiA4 y el vector binario pESC4 con los genes nos-nptII y cab-gus. La mayor eficiencia de transformación, medida como el porcentaje de explantes que formaron raíces, se obtuvo en la toronja Duncan (78 %), seguida por la toronja Rio Red (68 %) y la lima dulce (60 %). Se detectó actividad de GUS en 89, 92 y 76 % de las raíces generadas en toronja Duncan, toronja Rio Red y lima dulce, respectivamente. Luego se regeneraron brotes adventicios a través de organogénesis en segmentos de raíz transformada cultivados en medios con citocininas o con citocininas y auxinas; tales brotes adventicios se generaron en 24 % de los casos en toronja Duncan, en 14 % de los de toronja Rio Red y en 8 % de los de lima dulce. Los análisis GUS confirmaron que las plantas regeneradas conservaron la actividad de este gen introducido a las raíces transformadas. Los resultados mostraron que el sistema de transformación establecido introdujo exitosamente ADN foráneo a la toronja y a la lima dulce, y que puede ser útil para la generación de plantas que expresen genes de interés agronómico.