EXPRESION DE GENES QUIMÉRICOS gag DEL VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA (VIH-1) EN TOMATE (Lycopersicon esculentum Mill.) Y EN Escherichia coli

Resumen

La secuencia nativa del gen gag del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) se expresó tanto en plantas transformadas de tomate (Lycopersicon esculentum Mill.) como en E. coli. Dos versiones quiméricas del gen gag (gag-ENV y gag-RT) se expresaron independientemente. El análisis de la expresión permitió detectar el ARNm de las construcciones en tejidos de hoja y fruto de tomate. Sin embargo, no se pudo detectar la presencia de la proteína Gag completa, aunque el anticuerpo sí detectó un dominio (p24) de Gag expresado en frutos de dos líneas transgénicas Gag-ENV. En la expresión del VIH en células de mamíferos, las secuencias nativas de genes tardíos como gag promueven la desestabilización de los mensajeros virales, que probablemente también se produzca en las células vegetales. Gag es capaz de formar partículas tipo virus (PTV) del VIH en sistemas de expresión heteróloga, como E. coli y levaduras. En este trabajo, las construcciones Gag-RT y Gag-ENV se expresaron en células de E. coli para confirmar si las proteínas quiméricas Gag- ENV y Gag-RT podían formar PTV. La expresión de estas construcciones rindieron niveles en E. coli de 2 mg L^-1 para la proteína Gag- RT y de 4 mg L^-1 para Gag-ENV, de proteína purificada. Micrografías electrónicas permitieron verificar la formación de PTV en el citoplasma de E. coli expresando la proteína Gag-ENV, lo cual indica que la fusión de los epítopos no interfirió con el ensamblaje de Gag en células bacterianas.